自動蛋白印跡儀
產(chǎn)品名稱
自動蛋白印跡儀
管理類別
第二類
型號規(guī)格
Blotray 833、Blotray 866
結(jié)構(gòu)及組成/主要組成成分
由控制系統(tǒng)、試劑管道系統(tǒng)、加熱電阻絲及軟件組成。
適用范圍/預(yù)期用途
適用于免疫印跡試驗中的自動清洗、振蕩和孵育。
產(chǎn)品儲存條件及有效期
14-AUG-24
（一）蛋白印跡儀操作規(guī)程
免疫印跡法操作步驟
推薦訪問：免疫印跡法臨床應(yīng)用免疫印跡主要試劑免疫印跡分類和原理免疫印跡法實驗原理和目的免疫印跡法原理、試劑準備和注意事項
免疫印跡法就是將蛋白質(zhì)往膜上轉(zhuǎn)移，之后利用抗體進行檢測。能夠使用相應(yīng)抗體作為一抗對已知表達蛋白進行檢測，能夠通過融合部分的抗體對新基因的表達產(chǎn)物進行檢測。
操作步驟
一、獲取蛋白質(zhì)樣品：
細菌誘導(dǎo)表達后，能夠通過電泳上樣緩沖液將細胞直接裂解，將勻漿緩沖液加在真核細胞上，機械或超聲波室溫勻漿0.5-1分鐘。之后4攝氏度下13,000g離心15分鐘，取上清液作為樣品。
二、電泳：
對電泳凝膠進行制備，進行SDS-PAGE。
三轉(zhuǎn)移：（半干式轉(zhuǎn)移）
1、完成電泳后將膠條切成合適大小，使用轉(zhuǎn)膜緩沖液平衡，分別進行3次，每次5分鐘。
2、膜處理：將與膠條同樣大小的濾紙和NC膜預(yù)先裁好，將其在轉(zhuǎn)膜緩沖液中浸沒10分鐘。
3、轉(zhuǎn)膜：轉(zhuǎn)膜裝置按照從下至上的順序依次將陽碳板、24層濾紙、NC膜、凝膠、24層濾紙、陰碳板放好，精確對齊濾紙、凝膠、NC膜，每一步均將氣泡去除，將500g重物壓上，吸干碳板上多余的液體。將電源接通，恒流1mA/cm2，轉(zhuǎn)移1.5hr。完成轉(zhuǎn)移后，將電源斷開，取出膜，對待測膜條割取來做免疫印跡。在膜染色液中放入有蛋白標準的條帶染色50之后，在50%甲醇中多次脫色，至背景清晰，然后用雙蒸水洗，風(fēng)干，保存在兩層濾紙之間，和顯色結(jié)果對比。
四免疫反應(yīng)：
1、洗膜使用0.01M PBS進行清洗，每次5分鐘，一共3次。
2.將包被液加入加入，室溫下保持2小時。
3.將包被液棄掉，洗膜使用0.01M PBS進行清洗，每次5分鐘，一共3次。
4.將一抗加入（用0.01M PBS根據(jù)合適稀釋比例進行稀釋，膜必須全部為液體所覆蓋），在4攝氏度下放置超過12小時，陰性對照，一抗使用1%BSA替代，其余步驟和實驗組一樣。
5.將1%BSA和一抗棄掉。膜使用0.01M PBS分別進行清洗，每次5分鐘，一共4次。
6、將辣根過氧化物酶偶聯(lián)的二抗加入（用0.01M PBS根據(jù)合適稀釋比例進行稀釋），平穩(wěn)搖動，室溫下保持兩
更新時間：2024/11/12 13:41:15
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標簽：自動蛋白 自動蛋白印跡儀 印跡儀
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